Current Issue

Porphyromonas gingivalis KCOM 2804는 한국구강미생물자원(Korean Collection for Oral Microbiology, Gwang-ju, Korea)에서 분양받아 사용하였다. P. gingivalis KCOM 2804 균주는 tryptic soy broth (TSA; BD Difco Laboratories, Franklin Lakes, NJ, USA)에 0.05% cysteine HCl-H₂O, 0.5% yeast extract, 0.5 mg/mL hemin 및 2 μg/mL vitamin K₁이 추가된 배지에 접종하여, 37 ℃ anaerobic chamber (Bactron I, Sheldon Manufacturing Inc., Cornelius, OR, USA)와 혐기성 조건(10% H₂, 5% CO₂, 85% N₂)에서 배양하였다(13). P. gingivalis KCOM 2804 균주 LPS는 인트론(iNtRon) 사의 LPS extraction kit (iNtRon, Seongnam, Korea)를 사용하여 추출한 후 동결 건조하여 무게를 측정한 후에 농도를 구하여 사용하였다(13).

치조골 흡수를 일으키는 치주질환에 MEC 효과를 실-결찰을 쥐의 상악 오른쪽과 왼쪽 제2대구치 주위로 둘러싸는 형태의 치주질환 유발 모델에서 평가하였다. 모든 쥐들에 대한 실험은 조선대학교 동물실험윤리심의위원회의 심의를 거쳐 진행하였다(CIACUC2018-S0024). 전반적인 실험 설계는 선행연구와 유사하였다(13). 즉, 실험군은 총 6개 그룹이었으며, 각 그룹 당 6마리의 수컷 쥐들(6주, 180-230 g)을 무작위적으로 배당하여 사용하였다. 각 그룹에 해당되는 망고스틴껍질추출물분말(Savesta, Karnataka, India; Maypro Industries, Ltd, Purchase, NY, USA)과 프로폴리스추출물(NS Nutratech Australia, Silverwater, NSW, Australia)을 멸균된 증류수에 현탁시켜 쥐에게 섭취시켰다. 망고스틴껍질추출물분말과 프로폴리스추출물 분말의 섭취양은 실험에 사용한 쥐들의 평균 무게 200 g에 비례하는 혈액량 16 mL (체중의 약 8%가 혈액인 점을 고려함)을 기준으로 정하였다. 실험군은 다음과 같다: A) Non-Lig 그룹: 매일 분말의 용매인 멸균된 증류수를 사료와 함께 먹인 음성 대조군. B) Lig+L+DW 그룹: 5-0의 실(직경 0.5-0.6 mm)을 상악 제2대구치의 cervical part에 고정시키고, 1×PBS로 희석된 20 μg/mL PgLPS를 주사기로 협측 및 설측 치은 점막에 각각 0.05 mL씩 매주 1회씩 주사하였으며, 매일 멸균된 증류수 0.1 mL을 경구용 존대를 이용하여 투여한 실험군. C) Lig+L+MEC 0.5:34 그룹: Lig+L+DW 그룹처럼 실을 결찰하고 pgLPS를 주사한 후, 망고스틴껍질추출물분말(8 μg)과 프로폴리스추출물분말(544 μg)을 배합한 망고스틴껍질추출물등복합물(이하 “MEC 0.5:34”)을 멸균된 증류수 0.1 mL에 현탁하여 매일 경구용 존대를 이용하여 투여한 실험군. D) Lig+L+MEC 1:68 그룹: Lig+L+DW 그룹처럼 실을 결찰하고 PgLPS를 주사한 후, 프로폴리스추출물분말(1,088 μg)과 망고스틴껍질추출물분말(16 μg)을 배합한 망고스틴껍질추출물등복합물(이하 “MEC 1:68”)을 멸균된 증류수 0.1 mL에 현탁시켜 매일 경구용 존대를 이용하여 투여한 실험군. E) Lig+L+MEC 1:34 그룹: Lig+L+DW 그룹처럼 실을 결찰하고 PgLPS를 주사한 후, 망고스틴껍질추출물분말(16 μg)과 프로폴리스추출물분말(544 μg)을 배합한 망고스틴껍질추출물등복합물(이하 “MEC 1:34”)을 멸균된 증류수 0.1 mL에 현탁하여 매일 경구용 존대를 이용하여 투여한 실험군. F) Lig+L+MEC 2:68 그룹: Lig+L+DW 그룹처럼 실을 결찰하고 PgLPS를 주사한 후, 프로폴리스추출물분말(1,088 μg)과 망고스틴껍질추출물분말(32 μg)을 배합한 망고스틴껍질추출물등복합물(이하 “MEC 2:68”)을 멸균된 증류수 0.1 mL에 현탁하여 매일 경구용 존대를 이용하여 투여한 실험군.

동물실험에서 모든 쥐를 Zoletil^® (20 mg/kg; Virbac, Carros, France)으로 전신마취 시킨 후 실험을 시행하였으며, 실험은 3주 동안 시행하였다. 실험 마지막 날인 3주째에는 마취를 하여 상악 제2대구치 주위에서 채득한 치아를 포함한 조직편을 10% formaldehyde (DUKSAN Science, Seoul, Korea) 처리 후 마이크로시티 측정(micro-CT)을 위해 준비하였다.

모든 상악 조직편을 90 kVp의 acceleration potential과 88 µA의 beam current에서 2분 동안 high-resolution micro-CT scanner (Quantum GX micro-CT Imaging System, PerkinElmer, Hopkinton, MA, USA)을 이용하여 스캔을 하였다. 이때 image pixel size는 20 μm이었다. micro-CT data는 software programs (OnDemand 3D^TM, Cybermed, Seoul, Korea)을 통해 재건하고 형태화한 후 분석을 하였다. 이런 과정을 통해 모든 방향과 모든 폭경에서 치아주위와 치조골 주위의 3차원적인 구조물들을 평가하였다. 평가항목은 백악법랑질경계부(cementoenamel junction, CEJ), 치근면(root surface), 그리고 치조정(alveolar bone crest, ABC)이었고, 이 구조물들 사이의 관계를 선으로 그려서 평가하였다. CEJ와 ABCs의 coronal plane 사이의 거리는 6군데에서 측정하였다. 즉, 상악 좌·우측 제2대구치의 mesio-buccal, disto-buccal, mid-buccal, mesio-palatal, disto-palatal 그리고 mid-palatal sites에서 측정하였다. 치조골 소실 억제능은 다음과 같은 계산식에 의해 구하였다.

각 실험군 치조골 소실 억제능 (%) = {100 – [각 실험군 치조골 소실양 평균 – 음성대조군(Non-Lig) 치조골 소실양 평균] / [양성대조군 (Ling+L+DW) 치조골 소실양 평균 – 음성대조군 치조골 소실양 평균] × 100}

실험군의 실험수치는 평균±표준편차로 표시하였고, 집단 간의 통계적 유의 수준의 차이가 있는지를 검증하기 위해 SPSS 통계프로그램(version 12, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)을 이용한 비모수검정법인 Mann-Whitney U test를 실시하였다. 분석 결과 95% 신뢰수준에서 유의 확률이 0.05(유의수준 5%) 미만(p<0.05)일 때 두 집단 간의 유의미한 차이가 있다고 해석하였다.